GATA-4过表达增加大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞
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【摘 要】目的研究GATA-4转染骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞及表达心肌细胞特异性标志物的能力。方法分离培养MSCs及心肌细胞(CM)。第3代MSCs转染GATA-4基因(MSCGATA-4)并通过实时定量聚合酶链反应(PCR)、Western blot和免疫组化鉴定GATA-4的表达。MSCGATA-4与CM嵌套式共培养1周,通过real-time PCR和Western blot检测其心肌基因BNP、α-actinin和Islet-1的表达,用免疫组化观察α-actinin的表达。与CM混合共培养后1周后,观察MSCs的搏动情况,并用流式细胞仪检测心肌分化率。结果 MSCGATA-4组GATA-4的表达明显高于对照组(只表达GFP)。MSC与CM嵌套式共培养后,MSCGATA-4组的BNP、α-actinin和Islet-1的mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P〈0.05)。混合共培养后,可见部分MSCGATA-4的搏动,同时部分MSC的α-actinin染色阳性。用流式细胞仪检测心肌分化率,MSCGATA-4组的心肌分化率明显高于对照组(P〈0.05)。结论 GATA-4过表达可以增加MSCs分化成心肌样细胞,高表达BNP、α-actinin和Islet-1。
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