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【摘 要】目的构建人胱抑素C（CysC）基因的原核表达质粒pColdTF—CysC，表达并制备去标签蛋白的CysC。方法用人CysC的全长编码基因插入原核表达载体pColdTF并测序鉴定。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导、镍柱纯化后获得带有His标签的重组蛋白TF—CysC。利用GST—HRV3C蛋白酶去除该融合蛋白的TF标签，再经分子筛一步法同时去除TF标签、3c蛋白酶获得CysC，SDS—PAGE鉴定其纯度。用该CysC免疫新西兰大白兔，制备抗血清，并用间接ELISA及Westernblot鉴定。结果测序结果与Genbank中人CysC序列一致，实现了cysc可溶性高表达。纯化的无标签CysC纯度大于95％，分子质量约为13．3ku，与预期相符。免疫家兔后，获得的抗血清效价达到1：4×10＇以上，能特异性识别市售CysC蛋白。该蛋白稳定性良好，在4oC保存一个月未见明显下降。结论成功应用原核表达系统，获得了可用作免疫诊断试剂标准品的CysC，为进一步建立CysC的免疫检测方法奠定了基础。