【出 处】：

【作 者】： 陈娴 ; 谢渊 ; 赵艳 ; 周建奖

【摘 要】目的通过改建pSilencer3.1-H1载体快速有效筛选重组shRNA表达载体,并可使线性化载体环化,长期保存。方法制备含有单一限制性内切酶NotⅠ识别序列的双链DNA插入片段,与BamHⅠ和HindⅢ酶切线性化的shRNA表达载体pSilencer3.1-H1连接,构建载体pSilencer3.1-H1/NotⅠ,再用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pSilenc-er3.1-H1/NotⅠ,将含靶向目的基因JAK2siRNA表达框的DNA模板与其连接,构建pSilencer3.1-H1/JAK2的shRNA表达载体,提取质粒DNA,用NotⅠ进行单酶切,快速选择阳性克隆,选取不能被NotⅠ切开的质粒进行测序鉴定。随后将pSilencer3.1-H1/JAK2转染胃癌细胞系,用Western blot检测JAK2蛋白的表达。结果通过测序证实pSilencer3.1-H1/NotⅠ和含JAK2siRNA表达框的表达载体成功构建,将其转染胃癌细胞系AGS后,抑制了JAK2蛋白的表达。结论通过对pSilencer3.1-H1表达载体的改建可以快速有效地筛选shRNA表达载体。